ÖZET

Amaç:

Blastocystis, insanlar ve kemirgenler dahil birçok canlıda görülen zoonotik karakterli bir protozoondur. Bu çalışmada, Türkiye’de ilk kez kemirgenlerde (laboratuvar ratlarında) Blastocystis görülme sıklığının ve alt tiplerinin belirlenmesi, ayrıca obezite ile ilişkisinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.

Yöntemler:

Çalışmaya Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi’nde yer alan 54 erkek Sprague-Dawley rat dahil edilmiştir. Bunların 30’unu yüksek yağlı diyetle (obez) beslenmiş ratlar, kalan 24’ünü standart (normal) yem ile beslenen ratlar oluşturmuştur. Blastocystis pozitifliği, dışkı örneklerinden nükleik asit ekstraksiyonu sonrası küçük alt birim 18S rRNA geninin amplifikasyonu ile belirlenmiştir. Blastocystis alt tipleri, kısmi 18S rRNA gen sekanslarının veri tabanında (pubmlst.org/blastocystis) karşılaştırılması ile tespit edilmiştir. Ayrıca, neighbor-joining metodu kullanılarak izolatların evrimsel uzaklıklıklarını gösteren filogenetik ağaç oluşturulmuştur.

Bulgular:

Çalışmamızda 54 laboratuvar ratının 33’ünde (%61,1) Blastocystis tespit edilmiştir. Ek olarak, Blastocystis görülme sıklığı obez ve normal ratlar arasında istatistiksel olarak anlamlı düzeyde farklılık göstermiştir (p<0,05, sırasıyla; %43,3 ve %83,3). Veri tabanı ile karşılaştırıldığında tüm izolatların alt tipi 4 (ST4) olarak tanımlanmıştır. Blastocystis 18S rDNA dizisinin filogenetik analizi, bu çalışmadaki sekansların Çin, Japonya, Birleşik Krallık ve Çek Cumhuriyeti dahil diğer ülkelerden alınan referans ST4 alt tipleriyle yakın olduğunu göstermiştir.

Sonuç:

Çalışmamız, laboratuvar ratlarında Blastocystis kolonizasyonunun yüksek olduğunu ortaya koymakta olup, bu sonuç in vivo deney yapan araştırmacılar için bulaş riskinin yüksek olabileceğine dikkat çekmektedir. Obez rat grubunda normal ratlara göre Blastocystis görülme sıklığının daha düşük olması, Blastocystis’in sağlıklı bağırsak florasının bir göstergesi olabileceği fikrini desteklemektedir. Tüm sıçanlarda ST4’ün saptanması, bu alt tipin kemirgenlerde baskın olduğunu gösteren diğer araştırmalar ile uyum göstermektedir.

References

Yoshikawa H, Wu Z, Pandey K, Pandey BD, Sherchand JB, Yanagi T, et al. Molecular characterization of Blastocystis isolates from children and rhesus monkeys in Kathmandu, Nepal. Vet Parasitol 2009; 160: 295-300.

Maloney JG, Lombard JE, Urie NJ, Shivley CB, Santin M. Zoonotic and genetically diverse subtypes of Blastocystis in US pre-weaned dairy heifer calves. Parasitol Res 2019; 118: 575-82.

Popruk S, Pintong R, Radomyos P. Diversity of Blastocystis subtypes in humans. Journal of Tropical Medicine and Parasitology 2013; 36: 88-97.

Wawrzyniak I, Poirier P, Viscogliosi E, Dionigia M, Texier C, Delbac F, et al. Blastocystis, an unrecognized parasite: an overview of pathogenesis and diagnosis. Ther Adv Infect Dis 2013; 1: 167-78.

Baker DG. Natural pathogens of laboratory mice, rats, and rabbits and their effects on research. Clin Microbiol Rev 1998; 11: 231-66.

Dobner J, Kaser S. Body mass index and the risk of infection - from underweight to obesity. Clin Microbiol Infect 2018; 24: 24-8.

Baothman OA, Zamzami MA, Taher I, Abubaker J, Abu-Farha M. The role of Gut Microbiota in the development of obesity and Diabetes. Lipids Health Dis 2016; 15: 108.

Defaye M, Nourrisson C, Baudu E, Warwzyniak I, Bonnin V, Bonnet M, et al. Efficient and reproducible experimental infections of rats with Blastocystis spp. PLoS One 2018; 13: e0207669.

Lee MO Determination of the surface area of the white rat with its application to the expression of metabolic results. American Journal of Phys-Leg Cont 1929; 89: 24-33.

Scicluna SM, Tawari B, Clark CG. DNA barcoding of blastocystis. Protist 2006; 157: 77-85.

Jolley KA, Maiden MC. BIGSdb: Scalable analysis of bacterial genome variation at the population level. BMC Bioinformatics 2010; 11: 595.

Saitou N, Nei M. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees. Mol Biol Evol 1987; 4: 406-25.

Tamura K, Stecher G, Peterson D, Filipski A, Kumar S. MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0. Mol Biol Evol 2013; 30: 2725-9.

Osman M, Bories J, El Safadi D, Poirel MT, Gantois N, Benamrouz-Vanneste S, et al. Prevalence and genetic diversity of the intestinal parasites Blastocystis sp. and Cryptosporidium spp. in household dogs in France and evaluation of zoonotic transmission risk. Vet Parasitol 2015; 214: 167-70.

Li J, Yuan Y, Jiang Y, Wang W, Chao L, Sun R, et al. Molecular identification and subtyping of Blastocystis sp. in laboratory rats in China. Parasite 2020; 27: 35.

Yoshikawa H, Yoshida K, Nakajima A, Yamanari K, Iwatani S, Kimata I. Fecal-oral transmission of the cyst form of Blastocystis hominis in rats. Parasitol Res 2004; 94: 391-6.

Farah Haziqah MT, Mohd Zain SN, Chandrawathani P, Premaalatha B, Mohd Khairul Nizam MK, et al. Genetic diversity of rodent Blastocystis sp. from Peninsular Malaysia. Trop Biomed 2018; 35: 586-92.

Ozyurt M, Kurt O, Mølbak K, Nielsen HV, Haznedaroglu T, Stensvold CR. Molecular epidemiology of Blastocystis infections in Turkey. Parasitol Int 2008; 57: 300-6.

Katsumata M, Yoshikawa H, Tokoro M, Mizuno T, Nagamoto T, Hendarto J, Asih, et al. Molecular phylogeny of Blastocystis isolates from wild rodents captured in Indonesia and Japan. Parasitol Res 2018; 117: 2841-6.

Mohammadpour I, Bozorg-Ghalati F, Gazzonis AL, Manfredi MT, Motazedian MH, Mohammadpour N. First molecular subtyping and phylogeny of Blastocystis sp. isolated from domestic and synanthropic animals (dogs, cats and brown rats) in southern Iran. Parasit Vectors 2020; 13: 365.

Dagci H, Kurt Ö, Demirel M, Mandiracioglu A, Aydemir S, Saz U, et al. Epidemiological and diagnostic features of blastocystis infection in symptomatic patients in izmir province, Turkey. Iran J Parasitol 2014; 9: 519-29.

Malatyalı E, Ertabaklar H, Ertuğ S. DNA Barkotlama Yöntemiyle Blastocystis Alt Tiplerinin Belirlenmesi ve Tanı Yöntemlerinin Değerlendirilmesi [Subtype Distribution of Blastocystis spp. with DNA Barcoding and Evaluation of Diagnostic Methods]. Mikrobiyol Bul 2019; 53: 308-18.

Adıyaman Korkmaz G, Doğruman Al F, Mumcuoğlu İ. Dışkı örneklerinde Blastocystis spp. Varlığının mikroskobik, kültür ve moleküler yöntemlerle araştırılması [Investigation of the presence of Blastocystis spp. in stool samples with microscopic, culture and molecular methods]. Mikrobiyol Bul 2015; 49: 85-97.

Sarzhanov F, Köster PC, Dogruman-Al F, Bailo B, Dashti A, Demirel-Kaya F, Carmena D. Detection of enteric parasites and molecular characterization of Giardia duodenalis and Blastocystis sp. in patients admitted to hospital in Ankara, Turkey. Parasitology 2021; 148: 550-61.

Büyükbaba Boral Ö, Çelik Payçu DG, Akgül A, İşsever H. Blastocystis spp. saptanan 50 semptomatik hastada subtip dağılımın saptanması. Kocaeli Üniversitesi Sağlık Bilimleri Dergisi 2017; 3: 6-10.

Dogan N, Aydin M, Tuzemen NU, Dinleyici EC, Oguz I, Dogruman-Al F. Subtype distribution of Blastocystis spp. isolated from children in Eskisehir, Turkey. Parasitol Int 2017; 66: 948-51.

Koltas IS, Eroglu F. Subtype analysis of Blastocystis isolates using SSU rRNA-DNA sequencing in rural and urban population in southern Turkey. Exp Parasitol 2016; 170: 247-51.

Mülayim S, Aykur M, Dağcı H, Dalkılıç S, Aksoy A, Kaplan M. Investigation of Isolated Blastocystis Subtypes from Cancer Patients in Turkey. Acta Parasitol 2021; 66: 584-92.

Onder Z, Yildirim A, Pekmezci D, Duzlu O, Pekmezci GZ, Ciloglu A, et al. Molecular identification and subtype distribution of Blastocystis sp. in farm and pet animals in Turkey. Acta Trop 2021; 220: 105939.

Andersen LO, Stensvold CR. Blastocystis in Health and Disease: Are We Moving from a Clinical to a Public Health Perspective? J Clin Microbiol 2016; 54: 524-8.

Marques C, Meireles M, Norberto S, Leite J, Freitas J, Pestana D, et al. High-fat diet-induced obesity Rat model: a comparison between Wistar and Sprague-Dawley Rat. Adipocyte 2015; 5: 11-21.

Petriz BA, Castro AP, Almeida JA, Gomes CP, Fernandes GR, Kruger RH, et al. Exercise induction of gut microbiota modifications in obese, non-obese and hypertensive rats. BMC Genomics 2014; 15: 511.

Koliada A, Syzenko G, Moseiko V, Budovska L, Puchkov K, Perederiy V, et al. Association between body mass index and Firmicutes/Bacteroidetes ratio in an adult Ukrainian population. BMC Microbiol 2017; 17: 120.

Andersen LO, Bonde I, Nielsen HB, Stensvold CR. A retrospective metagenomics approach to studying Blastocystis. FEMS Microbiol Ecol 2015; 91: fiv072.

Tito RY, Chaffron S, Caenepeel C, Lima-Mendez G, Wang J, Vieira-Silva S, et al. Population-level analysis of Blastocystis subtype prevalence and variation in the human gut microbiota. Gut 2019; 68: 1180-9.

Krogsgaard LR, Engsbro AL, Stensvold CR, Nielsen HV, Bytzer P. The prevalence of intestinal parasites is not greater among individuals with irritable bowel syndrome: a population-based case-control study. Clin Gastroenterol Hepatol 2015; 13: 507-513.e2.

Coskun A, Malatyali E, Ertabaklar H, Yasar MB, Karaoglu AO, Ertug S. Blastocystis in ulcerative colitis patients: Genetic diversity and analysis of laboratory findings. Asian Pac J Trop Med 2016; 9: 916-9.

Petersen AM, Stensvold CR, Mirsepasi H, Engberg J, Friis-Møller A, Porsbo LJ, et al. Active ulcerative colitis associated with low prevalence of Blastocystis and Dientamoeba fragilis infection. Scand J Gastroenterol 2013; 48: 638-9.

Türkiye’de İlk Kez Kemirgenlerde (Laboratuvar Ratlarında) Blastocystis’in Moleküler Karakterizasyonu ve Obez/Non-obez Ratlarda Yaygınlığının Karşılaştırılması

ÖZET

References