Öz
Amaç
Bu çalışmada rutin mikrobiyoloji laboratuvarlarında bulunabilecek besiyerlerinin Leishmania tropica (L. tropica promastigotlarının üretilmesindeki etkinliğinin test edilmesi amaçlanmıştır.
Yöntemler
Bu çalışmada rutin mikrobiyoloji laboratuvarında kullanılan yeast extract agar, triptik soy broth, saboroud dextroz agar, brucella agar ve Columbia agar denenmiştir. Sekiz adet kansız (BY1-BY8), sekiz adet kanlı (KBY1-KBY8) besiyeri oluşturulmuştur. L. tropica promastigotları 105 promastigot/mL konsantrasyonda tüm besiyerlerine inoküle edilmiş ve 12 gün boyunca inkübe edilmiştir. Besiyerlerindeki promastigot sayısı günlük olarak sayılmıştır.
Bulgular
Novy-McNeal-Nicolle (NNN) besiyeri ile karşılaştırıldığında, L. tropica promastigotlarının üremesinde en iyi performansı BY7, BY8 ve KBY7 ve KBY8 besiyerleri göstermiştir. BY7 ve BY8 besiyerlerinde 1. gün promastigot sayısı 103 promastigot/mL iken 5. günde 104 promastigot/mL’ye ulaşmıştır. BY7 besiyerinde 8. günde 107 promastigot sayılmış ve 12. güne kadar bu şekilde devam etmiştir. BY8 besiyerinde ise 8. günde 105 promastigot sayılırken sonraki günlerde azalarak 12. günde 103 promastigot/mL’yedüşmüştür. KBY7 ve KBY8 besiyerlerinin her ikisinde de 1. günde promastigot sayısı 103 promastigot/mL iken 8. günde 107 promastigot/mL’ye çıkmış ve 12. güne kadar bu şekilde devam etmiştir.
Sonuç
L. tropica’nın üretilmesinde en iyi performansı içeriğinde Columbia agar bulunan BY7, BY8 ve KBY7, KBY8 besiyerleri göstermiştir. Columbia agar, ucuz, hazırlanması kolay ve rutin mikrobiyoloji laboratuvarlarında kolayca temin edilebilir olması nedeniyle bu tür uygulamalar için güçlü bir alternatif olarak öne çıkmaktadır. Bu nedenle, promastigotlarınkültüründe konvansiyonel NNN besiyerine pratik ve etkili bir alternatif olarak önerilebilir.
Anahtar Kelimeler: Leishmania tropica, Columbia agar, Novy-McNeal-Nicolle, promastigot
Kaynakça
World Health Organization. Leishmaniasis. 2025. Available from: https://www.who.int/news‑room/fact‑sheets/detail/leishmaniasis. Accessed May 20, 2025.
GBD 2021 Diseases and Injuries Collaborators. Global incidence, prevalence, years lived with disability (YLDs), disability-adjusted life-years (DALYs), and healthy life expectancy (HALE) for 371 diseases and injuries in 204 countries and territories and 811 subnational locations, 1990-2021: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet. 2024; 403: 2133-61.
Sundar S, Chakravarty J. Recent Advances in the treatment of leishmaniasis. Pediatr Infect Dis J. 2024; 43: e310-3.
Sundar S, Rai M. Laboratory diagnosis of visceral leishmaniasis. Clin Diagn Lab Immunol. 2002; 9: 951-8.
Gonçalves C, Borges A, Dias V, Marques J, Aguiar B, Costa C, et al. Detection of human visceral leishmaniasis parasites in microscopy images from bone marrow parasitological examination. Applied Sciences. 2023; 13: 8076.
Rasti S, Ghorbanzadeh B, Kheirandish F, Mousavi SG, Pirozmand A, Hooshyar H, et al. Comparison of molecular, microscopic, and culture methods for diagnosis of cutaneous leishmaniasis. J Clin Lab Anal. 2016; 30: 610-5.
Mehrotra S, Tiwari R, Kumar R, Sundar S. Advances and challenges in the diagnosis of leishmaniasis. Mol Diagn Ther. 2025; 29: 195-212.
Cota GF, de Sousa MR, Demarqui FN, Rabello A. The diagnostic accuracy of serologic and molecular methods for detecting visceral leishmaniasis in HIV infected patients: meta-analysis. PLoS Negl Trop Dis. 2012; 6: e1665.
Domagalska MA, Imamura H, Sanders M, Van den Broeck F, Bhattarai NR, Vanaerschot M, et al. Genomes of Leishmania parasites directly sequenced from patients with visceral leishmaniasis in the Indian subcontinent. PLoS Negl Trop Dis. 2019; 13: e0007900.
Espada CR, Albuquerque-Wendt A, Hornillos V, Gluenz E, Coelho AC, Uliana SRB. Ros3 (Lem3p/CDC50) gene dosage is implicated in miltefosine susceptibility in Leishmania (Viannia) Braziliensis clinical isolates and in Leishmania (Leishmania) major. ACS Infect Dis. 2021; 7: 849-58.
Marston AT. The examination of parasitic protozoa. Belding DL (ed), Textbook of Parasitology. Appleton Century Crofts, New York; 1965; 1153-4.
Merlen T, Sereno D, Brajon N, Rostand F, Lemesre JL. Leishmania spp: completely defined medium without serum and macromolecules (CDM/LP) for the continuous in vitro cultivation of infective promastigote forms. Am J Trop Med Hyg. 1999; 60: 41-50.
Rodrigues Ide A, da Silva BA, dos Santos AL, Vermelho AB, Alviano CS, Dutra PM, et al. A new experimental culture medium for cultivation of Leishmania amazonensis: its efficacy for the continuous in vitro growth and differentiation of infective promastigote forms. Parasitol Res. 2010; 106: 1249-52.
Mesalam A, Lee KL, Khan I, Chowdhury MMR, Zhang S, Song SH, et al. A combination of bovine serum albumin with insulin-transferrin-sodium selenite and/or epidermal growth factor as alternatives to fetal bovine serum in culture medium improves bovine embryo quality and trophoblast invasion by induction of matrix metalloproteinases. Reprod Fertil Dev. 2019; 31: 333-46.
Habibzadeh S, Doroud D, Taheri T, Seyed N, Rafati S. Leishmania parasite: the ımpact of new serum-free medium as an alternative for fetal bovine serum. Iran Biomed J. 2021; 25: 349-58.
Sharief AH, Khalil EAG, Suliaman SM. In vitro cultivation of Leishmania donovani promastigotes: growth potential of human urine as replacement of fetal calf serum. Ann Syst Biol. 2021; 4: 1-4.
Limoncu ME, Balcioğlu IC, Yereli K, Ozbel Y, Ozbilgin A. A new experimental in vitro culture medium for cultivation of Leishmania species. J Clin Microbiol. 1997; 35: 2430-1.
Ozbilgin A, Ozbel Y, Alkan MZ, Atambay M, Ozcel MA. Cultivation of Leishmania sp. in nutrient broth. J Egypt Soc Parasitol. 1995; 25: 437-41.
Yereli K, Girginkardeşler N, Değerli K, Özbilgin A. A simple method for the cultivation of Leishmania infantum and Leishmania tropica strains in nutrient broth. Türkiye Parazitol Derg. 1997; 25: 111-3.
Ali SA, Khalil NY, Iqbal J, Yasinzai MM. In vitro maintenance of Leishmania promastigote in an egg-based biphasic culture medium. Methods Cell Sci. 1997; 19: 107-10.
Kaddu JB, Nyamori MP. Nutrient broth for the cultivation of Leishmania. J Parasitol. 1990; 76: 265-6.
Sadigursky M, Brodskyn CI. A new liquid medium without blood and serum for culture of hemoflagellates. Am J Trop Med Hyg. 1986; 35: 942-4.
de Oliveira Filho VA, Garcia MSA, Rosa LB, Giorgio S, Miguel DC. An overview of Leishmania in vitro cultivation and implications for antileishmanial screenings against promastigotess. Parasitologia. 2024; 4: 305-18.
Atlas RM. Handbook of microbiological media. 4th ed. Boca Raton (FL): CRC Press; 2010.
